传说在最后的晚餐上用耶稣圣杯喝水就能永生。在一次发掘金活动中，发现了记录圣杯的石碑，发现圣杯的存在能吸引很多疯子。印第安纳琼斯博士也是他们中的一员。甚至他的父亲老琼斯也陷入其中，但在给琼斯留下圣杯的笔记本后，他消失了踪影。踏上威尼斯的土地后，琼斯与事先约定的斯奈达博士见面，他们在图书馆以线索找到圣盾后，开始受到不明十字剑兄弟的追捕。经过一番周折，琼斯终于找到了老琼斯，与此同时，斯奈达的纳粹身份暴露了，笔记被抢走了。圣杯随时都可能落入纳粹手中。于是琼斯父子开始演绎拯救圣杯的精彩话剧！